肠道黏膜屏障保护试验

「机能性产品(functional product)」是指那些不仅是维持生命所需,同时亦涵盖对健康有益的食品。凡举对健康有益的部分,如降低慢性病的风险、辅助改善症状的能力、促进发育、生长及提高效能及其他健康需求等,均可认为是机能性产品之诉求。
凌越生医建立一系列细胞与动物实验,透过科学的证据证实产品的功效性及安全性,以确保每项机能性产品的质量:
确认成分与保健功效之关连性
并订定为达效果所需之摄取量
以科学试验平台证实其功效性与安全性

A. 模拟肠道细胞平台:

以Caco2肠道细胞株进行肠道系统之模拟,利用其细胞两侧,极化特性生长成monolayer之肠道屏障,观察样品加入后,测定细胞激素与生长激素分泌情况,以对于肠道细胞其生长,活化、修复与调节之能力。

 

B. 肠道修复动物试验:

随着生物年龄的增加, 许多些因子都可能令肠道上皮细胞受到损害或变得脆弱, 同时造成肠道免疫系统发生变化; 由于肠道屏障受到伤害导致通透性增加, 同时又大量接触病原菌或大分子蛋白质, 使得肠道发生过度发炎, 甚至增加了食物过敏的风险。 在这些情况下, 容易产生腹泻与呕吐等消化道问题; 同时也因为肠道细胞破损, 令此处的免疫系统遭遇大量抗原, 使得过敏反应发生的机率大幅提升, 进而导致皮肤或呼吸道的临床症状。 因此肠道的保护已成了不可忽视之关键。

 

实验动物以2%硫酸葡聚糖(dextran sulfate sodium, DSS)诱发其产生溃疡性结肠炎(严重出血反应), 使用EBS益生菌产品之后, 观察体重变化, 粪便潜血评分(bleeding score) 结肠长度(colon length)与组织切片结果作为产品效能评估之依据

抵抗病原菌感染试验

 

大肠杆菌(E.coli)为肠道内常见的细菌, 大多数大肠杆菌菌株对宿主无害, 并且为重要的肠道共生菌。 然而, 像是出血性大肠杆菌(enterohaemorrhagic E. coli, EHEC)等菌株, 其分泌的志贺毒素(Shiga toxin)可引起严重的疾病, 传染中主要透过被污染的食物, 如生的或未煮熟的肉类产品, 生鲜奶和被污染的生蔬菜和芽苗菜。 其临床症状包括腹痛,腹泻, 严重者甚至导致血痢,溶血性尿毒症候群(hemolytic uremic syndrome, HUS)和尿毒症(uremia)等可能致命的症状。

试验的方式以出血性大肠杆菌对B6小鼠进行感染, 实验结束牺牲小鼠进行分析回肠组织、 肝脏感染与粪便中EHEC毒素之分析。 观察EHEC感染所造成之症状(Shiga毒素與肝臟EHEC感染)可否改善, 进而保护肠道黏膜系统, 增进肠道屏障与免疫系统之完整性, 使大分子过敏原, 病菌与病毒无法轻易通过肠道黏膜系统, 而造成后续的肠道症状与皮肤过敏问题。

免疫相关细胞实验:

A.免疫细胞实验:

医试验将以实验小鼠与实验犬之细胞与样品进行共同培养, 观察细胞由样品活化之后的细胞激素分泌与CD marker表现之情形, 借以初步评估样品之效果。

a. 小鼠脾脏细胞: 此部分试验观察喂食样品对于次级淋巴组织之影响。 位于肠道免疫细胞经由淋巴循环或血液循环到达脾脏, 进而对脾脏中大量的乙细胞与Ţ细胞进行活化, 观察脾脏系统性免疫反应之影响。 b.犬只周边血液单核球 (peripheral blood mononuclear cell) : 犬只周边血单核球细胞中包含了Ţ细胞、B细胞、单核球与NK细胞, 此种模式可观察样品刺激之后,多种免疫细胞均存在之相互调节整体结果。

 

B. 过敏动物实验:

本动物试验期全长为28天,以卵白蛋白(ovalbumin, OVA)作为过敏原,辅以胶态氢氧化铝(aluminum hydroxide gel)作为佐剂(adjuvant),多次腹腔注射(intraperitoneal injection, IP)方式对BALB/ C小鼠致敏, 使其形成过敏体质。 试验期间并采集其血清样本, 测定其卵白蛋白专一性免疫球蛋白E(OVA-specific immunoglobulin (Ig) E)之含量, 于试验结束后牺牲取得小鼠脾脏细胞(splenocyte), 加以OVA培养并诱发细胞激素分泌,T helper (Th)1、 Th2与T regulator (Treg)细胞激素之分泌浓度, 如介白素-4(interleukin-4, IL-4)、 IL-12、IFN-γ (interferon )和IL-13浓度, 作为过敏体质改善之评论依据。