过敏原蛋白质

A. 过敏原蛋白纯化技术:

「过敏原」即引发人体产生过敏反应的物质。 大部分的过敏原都是蛋白质, 少数的过敏原却是一种「半抗原」(hapten), 其本身无法引发过敏反应, 必须与体内的蛋白(携带蛋白)结合才会引起过敏反应, 如金属类物质(鎳或鉻)或化学物质(甲醛)等。 有别于利用特定重组蛋白(单一片段)做检测, 凌越生医发展出过敏原全蛋白纯化技术, 针对蛋白质各片段进行筛检, 不错过可能造成过敏之蛋白质片段。 针对各蛋白质之特性, 个别设计不同的蛋白质纯化策略, 利用分子生物学技术及蛋白质体学技术纯化致敏蛋白。 目前凌越生医拥有近200种常见过敏原的全蛋白纯化技术, 吸入性包含了台湾常见的尘螨、 花粉与动物毛屑等项目; 而食入性则包含常引起过敏之食物如海鲜类、核果类、奶蛋类食物等 。

 

B. 过敏原蛋白活性确效标准及品质管理:

稳定的过敏原检测, 取决于每批过敏原蛋白的稳定性, 因此凌越生医建立完整的过敏原蛋白质活性确效标准及品质管理流程, 流程共包含:

a. 安全可靠的过敏原来源: 过敏原原料主要供应商为具FDA认证之供应商GREERTM及具有SS-EN ISO9001:2008 认证之供应商Allergon, 另外如为自制过敏原品项均会进行品项物种鉴定, 确认其来源与学名。 所有凌越生医的过敏原均提供最完整的过敏原资料库以供查询 。 b. 过敏原的稳定性: 过敏原蛋白浓度及组成评估, 将每批次萃取纯化的过敏原进行蛋白质定量与蛋白组成确认 (SDS-PAGE; Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis), 确保每次的过敏原蛋白质浓度及蛋白组成的一致性 。 c. 过敏原活性确效评估: 凌越生医血清库(5000例以上的血清) 具有索引系统资讯, 凌越生医利用此索引系统建立阳性品项之标准血清库, 每批次萃取纯化出来的过敏原, 将以此标准血清进行蛋白质活性确效实验, 在此同时会确认不同批次之活性, 以确认每批次的过敏原活性的一致性。

荧光链结免疫微数组芯片
(FLISA: Fluorescence-Linked Immunosorbent Array)

A. 蛋白微数组技术(Microarray protein chip):

凌越生医之蛋白质微数组技术的原理主要是利用蛋白质为探针,将其排列于玻璃的基材上,当加入检测样本后进行抗原-抗体免疫键结反应,反应后清洗玻片,再加入接上荧光物质的二抗抗体,反应后清洗去除未结合的荧光抗体,最后于雷射扫描仪读取特定波长,可用来检测样本中会引发过敏反应的专一性抗体。且于每次检测利用试剂中三组不同浓度的标准品划出标准曲线,可计算出各样品中的实际荧光值。

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B. 蛋白质芯片点片系统(Spotting system): BioDot AD3200

凌越生医过敏原蛋白质芯片的制造采用BioDot AD3200人机接口点片机系统,透过计算机点片程序设计搭配三维空间(X、Y、Z轴)的自动化机械手臂系统,藉由狭缝针与液体间的虹吸原理进行过敏原蛋白质的沾附,并以物理接触方式将过敏原蛋白质点印于玻璃基材上。

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C. 蛋白质芯片扫描系统(Scan system)

凌越生医过敏原检测侦测系统采用荧光方法,利用Axon 4000B雷射扫描仪,透过特定波长的雷射能量激发键结于二级抗体的荧光分子,芯片扫描后的荧光影像信息会搭配AxSys软件进行讯号的分析,可于短时间内完成过敏原检测报告。

相较于传统的ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)过敏原检测分析,凌越生医的过敏原检测平台搭配半自动化扫描仪器及软件分析,且采用荧光显色方法,具有以下优势:

a.具有微量化的优势:检体需求极低。 b.稳定性与灵敏度佳:芯片上进行三重复之试验,确保检测之稳定性;同时可侦测至较低浓度(极限可低至pg等级)。 c.环保性与低成本:仅需少量试剂与耗材,减少资源使用。 d.效率高:多品项过敏原可同时检测,同时多量检体可同时进行检测,筛检过程仅需1-2小时即可完成。 e.扩充性:平台规格及检测项目具有扩充之弹性,在增加过敏原品项的情况下,并不需要增加检体量与试剂量。